不是可能存在,而是一定存在。
因為製備樣本中的rRNA佔到了總RNA的80%以上。
這樣在測序時,準確性必然會受到無可估計的影響。
“梅林,你的擔心是正確的。”陸時羨給予他認可的眼神道:“因此我們必須透過RNA富集的方法去除rRNA的干擾。”
說到這裡,就算幾人再遲鈍腦中也迅速想起一個字眼。
“oligo-dT富集法?”
“沒錯。”陸時羨打了個響指:“雖然剔除rRNA後進行WTA也有人使用,但在學界裡,由於樣本質量的高效性,一般都適用oligo-dT對poly(A)RNA進行富集。”
“rRNA剔除法較之於oligo-dT富集的缺陷是要求更高的測序深度,不然樣本的rRNA依然會存在一定的數量,富集效果並沒有達到想要的程度。”
這話說的已經非常直白了,以至於後面的操作流程都無需繼續強調了。
不過陸時羨還是非常認真地繼續著接下來地進行操作。
然後,才終於來到了最後的測序環節......
這就是會議上曼倫教授要求陸時羨小組所做的全部工作。
看似只有兩個字,但需要完成的工作實則非常繁瑣和細緻。
三人接下來停止了手裡的工作,圍站在陸時羨周圍看著他操作。
俗話說外行人看熱鬧,內行人看門道。
別人可能看的一頭霧水,但他們還不至於連操作的內容都看不懂。
對RNA進行片段化及純化操作。
對片段化RNA的產量及片段大小分佈進行分析。
對cDNA進行反轉錄、純化以及擴增,選擇適宜的片段大小建立擴增文庫。
對擴增後DNA產量及片段大小的分佈進行分析。
而此時的鮑勃簡直驚呆了,一旁的梅林和瑟琳也有些震撼。
因為操作到這一步,也就是他們三人之前一直在練習熟練的環節。
鮑勃眼睛睜大,有些不可思議地說道:“陸博士?這種精細的微觀實驗操作,你的動作似乎比之前還要快了。”
其實,他並不是第一次和陸時羨合作實驗的萌新。
作為主攻方向為生物技術的研究生,他的實驗操作技術在實驗室裡其實算的上是一把好手。
這跟他之前喜歡觀摩很多同學、教授甚至是耶魯實驗大牛的實驗操作過程分不開。
比他菜的他喜歡看,這樣就像學長學姐幸災樂禍地看低年級新生頂著烈日進行體檢一樣,讓他很有優越感和成就感。
比他強的他也喜歡看,因為一次優秀的實驗操作就像是放映一場電影特效大片。
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